Tripszin
A tripszin ( EC ) a hasnyálmirigy- lé peptidáza, amely részt vesz a fehérjék emésztésében . Ez egy szerin-proteáz , amely hidrolizálva a peptidkötéseket található következő C egy maradékot a lizin vagy arginin , amelyek aminosavak bázikus .
Tripszin
A kristályosított szarvasmarha-tripszin szerkezete ( PDB 1UTN )
| Pfam | PF00089 |
|---|---|
| InterPro | IPR001254 |
| OKOS | SM00020 |
| PROPITÁS | PDOC00124 |
| MEROPS | S1 |
| SCOP | 1c2g |
| SZUPERCSALÁD | 1c2g |
| CDD | cd00190 |
Szintézis
Ez szintetizálódik a hasnyálmirigy formájában tripszinogén ( inaktív proenzim ), majd tárolja az enzimes vezikulumok acinusos sejtek ahol kiválasztódik során az emésztés . A tripszinogén tripszinné történő aktiválása a propeptid enterokináz hatására történő hidrolízisének vagy a tripszin önaktiváló hatásának az eredménye. A kolecisztokinin-pankreozimin aktiválja az enzimek (tehát a tripszin) szekrécióját a hasnyálmirigy-lében.
Enzimaktivitás
Tripszin| EK sz. | EC |
|---|---|
| CAS-szám |
| IUBMB | IUBMB bejegyzés |
|---|---|
| IntEnz | IntEnz nézet |
| BRENDA | BRENDA bejárat |
| KEGG | KEGG bemenet |
| MetaCyc | Metabolikus út |
| PRIAM | Profil |
| EKT | Szerkezetek |
| MEGY | AmiGO / EGO |
A tripszin egy olyan endoproteáz, amely hidrolizálja azokat a peptidkötéseket, amelyekben egy bázikus aminosav ( Lys - | - Xaa vagy Arg - | - Xaa ) végzi savfunkcióját (kivéve azt az esetet, amikor a következő aminosavat (itt "Xaa" sematizálta) egy Prolin ). Ezeket az aminosavakat a C-terminálison vágja le. Más szavakkal, átalakítja a polipeptidláncokat rövidebb fehérje-láncokká az emésztés lehetővé tétele érdekében . 7,5–8,5 pH-értéken hatásos, inaktiválódik és néhány órán belül megemésztődik semleges pH-n (= 7) a belekben.
A tripszin részt vesz más enzimek, például az alfa-kimotripszin aktiválásában a kimotripszinogén polipeptidláncának hidrolitikus hasításával.
Ez az enzim annak S-tripszin vagy trysin-szerű formában is használják alatt 1 st hét humán embrionális fejlődés, a szegmentálás. A trofoblaszt választja ki a blastocystát körülvevő zona pellucida emésztése érdekében. Ezt a jelenséget D6 körüli járványnak nevezzük, amely lehetővé teszi az endometrium beültetését.
Gépezet
A tripszin a szerin proteázok családjába tartozik, amelynek archetípusa. Ezeket az enzimeket egy katalitikus triád jelenléte jellemzi, amely három aminosav oldalláncából áll : szerin (Ser-195), hisztidin (His-57) és aszpartát (Asp-102). Ezek a maradékok kölcsönhatásba lépnek és töltőrelét képeznek, amely nukleofilvé teszi az aktív hely szerinjét, és lehetővé teszi a hidrolizált peptidkötés karbonilcsoportjának támadását .
Ezenkívül a tripszin tartalmaz egy "oxianion-lyukat", amelyet a polipeptid gerincének amidcsoportjai határolnak a 193-as glicin és a 195-szerin szintjén . Ez az üreg befogadja a hasított peptikus kötés karbonilcsoportjának oxigénatomját , és stabilizálja a reakció közbensőjét a elősegítve az oxigén negatív töltésének kialakulását.
Az a felismerés, pozitív töltésű csoport, éppen leolvasással ellentétes irányban a hasítási hely végzi a karboxilátcsoport (-COO - ) az aszpartát 189, amely található alján a felismerés zsebében az oldallánc az aminosav előtt található ( A hasítási hely N- terminális oldala ). Az elismert aminosav pozitív töltése és az aszpartát negatív töltése közötti elektrosztatikus kölcsönhatás a fő tényező ebben a szelektivitásban.
Társult patológiák
A hasnyálmirigy-gyulladás és a cisztás fibrózis , a tripszin, hogy rosszul evakuáljuk, ez a fő oka a gyulladásos reakció a hasnyálmirigy.
használat
A tripszin a legtöbb állatban megtalálható. Ezt az enzimet széles körben használják proteomikai kutatási megközelítésekhez , különösen a fehérjék jellemzéséhez és szekvenálásához. Így különösen tömegspektrometriában használják fehérjék emésztésére az elemzés előtt.
A tripszint a sejttenyészetben használják a tenyészlombikokhoz vagy Petri- csészékhez tapadó sejtek leválasztására . A tripszin ugyanis hasítja az adhéziós membránfehérjéket, majd a sejteket szuszpenzióban találják meg. Ezt a "tripszinizálást" naponta használják sejttenyészetek fenntartására ( nagyobb tenyészlombikra váltással vagy a lombikok megsokszorozásával), a sejtek áramlási citometriával történő számlálására vagy más elemzések elvégzésére. Ez a kezelés azonban kissé befolyásolja a sejteket (életképesség, membránmarkerek), ezért a tripszin hatását korlátozni kell: a sejtek mosásával ki kell küszöbölni, a magzati borjúszérum (a membránfehérjék nagy feleslegben lévő fehérje) hozzáadásával is gátolja, vagy egy specifikus inhibitor. Alternatív módon más enzimeket is alkalmazunk.
A tripszint az immunhematológiában szabálytalan antitestek kimutatására vagy akár egy kariotípus létrehozása során is használják : például hisztonok hidrolizálásával és Giemsa festéssel kombinálva lehetővé teszi a G-sávok megjelenését a DNS-en, és ezáltal a kromoszómák. Így kimutatható egy kromoszóma-rendellenesség.
Humán tripszin szekvencia
Az A izoform 304 aminosavat tartalmaz.
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 MCGPDDRCPA RWPGPGRAVK CGKGLAAARP GRVERGGAQR GGAGLELHPL LGGRTWRAAR DADGCEALGT VAVPFDDDDK IVGGYTCEEN SLPYQVSLNS 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 GSHFCGGSLI SEQWVVSAAH CYKTRIQVRL GEHNIKVLEG NEQFINAAKI IRHPKYNRDT LDNDIMLIKL SSPAVINARV STISLPTTPP AAGTECLISG 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 WGNTLSFGAD YPDELKCLDA PVLTQAECKA SYPGKITNSM FCVGFLEGGK DSCQRDSGGP VVCNGQLQGV VSWGHGCAWK NRPGVYTKVY NYVDWIKDTI AANSA B izoform 260 aminosavat tartalmaz.
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 MELHPLLGGR TWRAARDADG CEALGTVAVP FDDDDKIVGG YTCEENSLPY QVSLNSGSHF CGGSLISEQW VVSAAHCYKT RIQVRLGEHN IKVLEGNEQF 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 INAAKIIRHP KYNRDTLDND IMLIKLSSPA VINARVSTIS LPTTPPAAGT ECLISGWGNT LSFGADYPDE LKCLDAPVLT QAECKASYPG KITNSMFCVG 210 220 230 240 250 260 FLEGGKDSCQ RDSGGPVVCN GQLQGVVSWG HGCAWKNRPG VYTKVYNYVD WIKDTIAANSA C izoform 247 aminosavat tartalmaz.
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 MNPFLILAFV GAAVAVPFDD DDKIVGGYTC EENSLPYQVS LNSGSHFCGG SLISEQWVVS AAHCYKTRIQ VRLGEHNIKV LEGNEQFINA AKIIRHPKYN 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 RDTLDNDIML IKLSSPAVIN ARVSTISLPT TPPAAGTECL ISGWGNTLSF GADYPDELKC LDAPVLTQAE CKASYPGKIT NSMFCVGFLE GGKDSCQRDS 210 220 230 240 GGPVVCNGQL QGVVSWGHGC AWKNRPGVYT KVYNYVDWIK DTIAANSMegjegyzések és hivatkozások
- Az itt feltüntetett tömeg és maradványok száma megegyezik a gén transzlációjából származó fehérje prekurzor értékével, a poszttranszlációs módosítások előtt , és jelentősen eltérhet a megfelelő értékektől A funkcionális fehérjéhez .
- http://www.interchim.fr/ft/1/158624.pdf tripszin inhibitorok (SBTI, BPTI, SPTI)
- http://www.interchim.fr/ft/N/N68081.pdf A sejtek gyengéd disszociációja az Accutase által
Lásd is
- A kimotripszin és a karboxipeptidáz A, két hasnyálmirigy-proteáz, amelyet a tripszin aktivál.