Hőstabil DNS-polimerázok

A hőstabil DNS-polimerázok olyan termofil szervezetekből származó DNS-polimerázok , mint például bizonyos archaea rendű baktériumok és kórokozók . Ezek a polimerázok magas hőmérsékleten (kb. 100 ° C) stabilak, ezért felhasználhatók polimeráz láncreakcióhoz (PCR) és más módszerekhez, amelyek lehetővé teszik a DNS amplifikálását és módosítását .

Bakteriális polimerázok

A baktériumokból származó fő hőstabil polimerázok a Taq polimeráz , Tfl polimeráz, Tma polimeráz, Tne polimeráz és Tth polimeráz.

Ezek a bakteriális polimerázok A. típusúak. 5 '→ 3' polimeráz aktivitással, 5 '→ 3' exonukleáz aktivitással rendelkeznek, és adenozint adnak a szintetizált DNS 3 'végéhez ( ragadós végek ). A processzivitás (angl. Processivity ) a DNS-polimerázok egyik meghatározott tulajdonságának számít, mint a polimeráz által beépített bázispárok átlagos száma, mielőtt leválnának az alkalmazott DNS-templátról (angol. Template ). A túl kicsi folyamatosság ezért korlátozza a qPCR reakcióban használt primerek közötti maximális távolságot . A Taq-polimeráz processzivitása körülbelül 200 bázispár.

Archaeal polimerázok

A legszélesebb körben alkalmazott termostabil DNS polimerázok archeákat Pfu-polimeráz , Pwo polimeráz , KOD polimeráz, TLI polimeráz (szinonima Vent ), Tag polimeráz, Tce polimeráz, Tgo polimeráz, TNA1 polimeráz, Tpe polimeráz, Tthi polimeráz, NEQ polimeráz és Pab polimeráz.

Megjegyzések és hivatkozások

  1. J. Cline, JC Braman, HH Hogrefe: A pfu DNS-polimeráz és más hőstabil DNS-polimerázok PCR-hűsége. In: Nukleinsavak Res . , Bd. 24., 1996. 18. sz., S. 3546–3551. PMID 8836181 ; PMC 146123 .
  2. B. Villbrandt, H. Szobek, B. Frey, D. Schomburg: Domain cseréje: kimérák Thermus aquaticus DNS-polimeráz, az Escherichia coli DNS-polimeráz I. és a Thermotoga neapolitana DNS-polimeráz. In: Protein Eng. , Bd. 13, Nr. 9, 2000, S. 645–654. PMID 11054459 .
  3. W. Abu Al-Soud, P. Râdström: Kapacitás kilenc termostabil DNS polimerázok, hogy közvetítsen DNS amplifikációs jelenlétében PCR-gátló mintákat. In: Appl. Ról ről. Microbiol. , Bd. 64, Nr. 10, 1998, S. 3748–3753. PMID 9758794 ; PMC 106538 .
  4. M. Takagi, M. Nishioka, H. Kakihara, M. Kitabayashi, H. Inoue, B. Kawakami, M. Oka, T. Imanaka: jellemzése a DNS polimeráz a Pyrococcus sp. a KOD1 törzs és alkalmazása a PCR-re. In: Appl. Ról ről. Microbiol. , Bd. 63, Nr. 11, 1997, S. 4504–4510. PMID 9361436 ; PMC 168769 .
  5. H. Kong, RB Kucera, WE Jack: jellemzése származó DNS polimeráz a hyperthermophile cheák Thermococcus litoralis. Szellőztesse a DNS-polimerázt, az egyensúlyi állapot kinetikáját, a hőstabilitást, a folyamatosságot, a szál elmozdulását és az exonukleáz aktivitásokat. In: J Biol Chem . , Bd. 268, Nr. 3, 1993, S. 1965–1975. PMID 8420970 .
  6. K. Böhlke, FM Pisani, CE Vorgias, B. Frey, H. Sobek, M. Rossi, G. Antranikian: A termofil euriararchaeon Thermococcus aggregans B-típusú DNS-polimerázának PCR-teljesítménye javult az Y-GG mutációival /Minta. In: Nukleinsavak Res. , Bd. 28., 2000. Nr. 20., S. 3910–3917. PMID 11024170 ; PMC 110800 .
  7. KP Kim, H. Bae, IH Kim, ST Kwon: A hipertermofil archeonból, a Thermococcus celerből származó DNS-polimeráz klónozása, expressziója és PCR-alkalmazása. In: Biotechnol Lett. (2011), Bd. 33 (2), S. 339-46. PMID 20953664 .
  8. B. Arezi, W. Xing, JA Sorge, HH Hogrefe: A hőstabil DNS-polimerázok amplifikációs hatékonysága. In: Analitikai biokémia. 321. sáv, Nummer 2, 2003. október, S. 226–235, PMID 14511688 . PDF .
  9. Y. Cho, HS Lee, YJ Kim, SG Kang, SJ Kim, JH Lee: A Thermococcus onnurineus NA1 hipertermofil archeon dUTPázának jellemzése és alkalmazása polimeráz láncreakciók amplifikációjában . In: Mar Biotechnol (NY) , Bd. 9, Nr. 4, 2007, S. 450–458. PMID 17549447 .
  10. JI Lee, YJ Kim, H. Bae, SS Cho, JH Lee, ST Kwon: Biokémiai tulajdonságok és egy hipertermofil euriararcha Thermococcus peptonophilus családból származó B család DNS-polimerázának biokémiai tulajdonságai és PCR-teljesítménye. In: Appl Biochem Biotechnol. , Bd. 160, Nr. 6, 2010, S. 1585–1899. PMID 19440663 .
  11. D. Marsic, JM Flaman, JD Ng: New származó DNS polimeráz a hipertermofil tengeri archaebaktérium Thermococcus thioreducens. In: Extremophiles , Bd. 12, Nr. 6, 2008, S. 775–788. PMID 18670731 .
  12. JG Song, EJ Kil, SS Cho, IH Kim, ST Kwon: Az ujjak aldomain közepén található aminosavmaradék részt vesz a Neq DNS-polimeráz processzivitásában: a megtervezett Neq DNS-polimeráz fokozott processzivitása és annak PCR-alkalmazása. In: Protein Eng. Nak,-nek. Só. , Bd. 23., 2010. Nr. 11., S. 835–842. PMID 20851826 .
  13. J. Dietrich, P. Schmitt, M. Zieger, B. Preve, JL Rolland, H. Chaabihi, Y. Gueguen: PCR teljesítménye nagymértékben termostabil proof-reading B-típusú DNS-polimeráz a Pyrococcus abyssi. In: FEMS Microbiol Lett. , Bd. 217, Nr. 1, 2002, S. 89–94. PMID 12445650 .