Az enzim immunoassay ELISA (az angol enzimhez kapcsolt immunszorbens assay , szó szerint "technikával enzimhez kapcsolt immunoszorbens", azaz enzim immunassay szilárd hordozó technika) laboratóriumi vizsgálat. Ezt a módszert elsősorban antitest vagy antigén jelenlétének kimutatására használják a mintában .
Ez a biokémiai elemzési technika az immun-enzimatikus detektálási technikák (vagy az enzim-immunvizsgálatok EIA- jának ) általánosabb keretébe tartozik , amelyben egy specifikus antitest (vagy fordítva egy antigén által vizsgált antitest) által vizsgált antigén felismerését követi. egy enzim által katalizált reakció, amely egy színes komponenst szabadít fel, amelynek mennyiségét spektroszkópiával vizsgáljuk . Ehhez az antigént egy enzimhez kovalensen kapcsolt antitest ismeri fel (vagy fordítva, az ellenanyagot egy jelölt antigén ismeri fel). A jelölt molekula megkötése az antitesthez kapcsolt enzim kromogén vagy fluorogén szubsztrátjának felhasználása után színes vagy fluoreszcens jelet bocsát ki. Ezeknek a technikáknak szembe kell nézniük a radioimmunológiai vizsgálatokkal (vagy RIA-val a rádió-immunvizsgálatok esetében ), amelyekben a jelölést egy rádióelem végzi, amelynek radiológiai aktivitását másodpercenként a szétesések számában mérik. A technika megvalósításának megkönnyítése érdekében, különösen nagyszámú elemezendő minta esetén, a kívánt antigénre specifikus antitest vagy a kívánt antitest által felismert antigén kapcsolódik a felhasznált hordozóhoz, amely be van fedve, innen ered az immunabszorpciós technika neve. A működési protokollok számos változata létezik, amelyek lehetővé teszik az antigénfelismerés specifitásának vagy érzékenységének növelését (közvetett, szendvics vagy kompetitív ELISA).
Mivel az ELISA felhasználható mind az antigén, mind az antitest jelenlétének felmérésére a mintában, hatékony eszköz mind a szérum antitestkoncentrációk meghatározásához (akár a HIV-tesztnél, akár a HIV-tesztnél. Nílus vírus ), csak antigén jelenlétének kimutatása. Az élelmiszeriparban is talált alkalmazásokat az élelmiszer-allergének , például a tej , a földimogyoró , a diófélék és a tojás kimutatására . Ez egy egyszerű, könnyen használható és olcsó teszt. Ezt korlátozza a specifikus antitestek elérhetősége.
Az antigén kimutatásának érzékenységének javítása érdekében a kívánt antigént felismerő antitest nem kapcsolódhat enzimhez, hanem specifikusan felismerhető egy második antitesttel, amely maga is kapcsolódik egy enzimhez .
Az enzim fokozóként működik: még akkor is, ha kevés enzimhez konjugált antitest kötődik, az enzim számos szignál képződését katalizálja, ami ezt a tesztet nagyon érzékennyé teszi, de növeli a hamis pozitívok számát is . Ezért logikusan szükséges ellenőrző kutakat biztosítani.
Az úgynevezett közvetett ELISA lépései, amelyeket a szérum antitestkoncentráció meghatározására használnak leggyakrabban:
A szendvics ELISA ennek a technikának egy kevésbé gyakori (klinikai) változata, amelyet antigénminta kimutatására használnak a szérumban vagy más mintában. Ez a technika viszont nagyon gyakori a kutatásban.
A folyamat nagy vonalakban zajlik az alábbiak szerint:
Amint azonban szemléltetjük, a leggyakrabban van egy további lépés, a detektáló antitestek hozzáadása annak elkerülése érdekében, hogy az antigénekhez az antigénhez konjugált antitestek keletkezzenek . Olyan kapcsolt enzim alkalmazása, amely felismeri más antitestek Fc-részét, lehetővé teszi az alkalmazását különböző helyzetekben és csökkenti az eljárás költségeit.
Ez a variáns lehetővé teszi egy antigén vizsgálatát a kötődő verseny elve alapján:
Ezért verseny van a jelzett antigének (ismert mennyiségben) és a jelöletlen (meghatározandó mennyiségben) antitestekhez való kötődésük miatt, amelyek hiányoznak. Így minél nagyobb a vizsgálandó antigének száma, annál nagyobb az arányuk az antitestek által visszatartott antigének között, és annál gyengébb lesz a jel. Ezzel szemben, ha az antigén kezdeti koncentrációja alacsony, a jel erős lesz.
Az ELISA kvantitatív vagy minőségi célokból végezhető:
Közvetlen ELISA-t használnak különböző fehérjék meghatározásához. Néhány példa az orvosi farmakológiai alkalmazásokból: pajzsmirigyhormonok, gyógyszerkoncentráció (a megfelelés értékeléséhez és / vagy az adagolás beállításához ) stb.
A legismertebb alkalmazás a nagyközönség számára az első vonalbeli HIV- teszt .
Az ELISA technika lehetővé teszi a kimutatását anti HIV antitestek a vérben szérumban (innen a „szeropozitív” vagy „szeronegatív). A technika nagyon érzékeny (a legtöbb esetben észlel, és a” hamis negatívok "(= negatív teszt, amikor a ha a beteg szeropozitív), szinte kizárandó, legalább akkor, ha a vizsgálatot a fertőző kontaktust követő három hónapon belül végzik el) és elfogadható specifitást (alacsony a " hamis pozitívok " aránya (= pozitív teszt az antitest nem specifikus reakciójával) antigén). Pozitív HIV-ellenes szerológia esetén azonban a mintákat megerősítő vizsgálatoknak kell alávetni, például Western-blot-vizsgálatnak , amely elektroforézisen alapuló technikát alkalmaz és rendkívül alacsony a hibaaránya.