Fürtözött, rendszeresen térközön belüli rövid palindrómás ismétlések

A genetikában a crispr ( "Rövid ismétlések palindromikusan csoportosítva és rendszeresen elosztva" ), amelyet gyakrabban CRISPR-nek (rövidítéssel ejtenek / krɪspəʳ / ) neveznek , a DNS-ben megismételt szekvenciák családjai . Egy ilyen család jellemzi egy sor rövid direkt ismétlődések (21-37 pár bázisok ), és szabályosan elhelyezkedő szekvenciák úgynevezett „  spacer  ” , általában egyedi, 20-tól 40 bázispár .

A rendszer CRISPR- case.9 , először használt tipizálására törzsek a baktériumok az utóbbi időben vált egy eszköz génsebészeti nagy potenciállal. CRISPR- Cas9 használják különösen a molekuláris véső bevezetése érdekében a helyi módosítások a genom (manipulációk gyakran minősítik genomi szerkesztő ) számos modell szervezetekre.

Első megfigyelés és egymást követő újrafelfedezések

Ezt az ismétlődő struktúrát Yoshizumi Ishino először 1987- ben észlelte Escherichia coliban . Ezután többször leírták különböző neveken:

Juan Francisco Martínez Mojica 2000-es cikke azt mutatja, hogy az összes korábbi leírás csak egy és ugyanazon entitás aspektusait jelentette. 2002-ben Jansen a Mojica csoport egyetértésével úgy határozott, hogy a CRISPR betűszó létrehozásával pontosítja a nómenklatúrát.

Ha az ismételt szekvencia jól megőrződik egy organizmuson belül, akkor a vonaton belüli egységek száma, a vonatok száma és még a vonatok jelenléte is erősen változó mennyiségű egyik vonaltól a másikig. Valójában CRISPR-eket alkalmaztak baktériumtörzsek tipizálására, ezt a technikát spoligotipizálásnak hívják .

Megoszlás az élő világban

Ezek az ismétlések az archeák és a baktériumok nemzetségeiben találhatók meg , de eukariótáknál még nem figyelték meg őket . A vírusok , bakteriofágok kimutatták, hogy kódolják CRISPR-Cas rendszer. A CRISPR-ek lehetnek a legszélesebb körben használt ismétlődő családok az élővilágban, a szekvenált szervezetek alig fele hordozza ezt a fajta ismétlést (a 2005 végén tesztelt több mint 200 genomból). A CRISPR régiók elfoglalják majdnem a teljes Archaeus genomot (azaz az elemzett archaea genomjának több mint 99% -át) és a bakteriális genom közel felét, mind a Gram + baktériumok, mind a Gram- baktériumok vonatkozásában . Bizonyos archaealis plazmidok a CRISPR-t homológ módon hordozzák a gazdaszervezet hordozóival. Ez a helyzet például a Sulfolobus és a pNOB8 plazmid esetében. Egyes szerzők beszámoltak a CRISPR jelenlétéről a mitokondriális DNS-ben (Flamand, 1992) , de ezeket az eredményeket nem sikerült reprodukálni.

Szerkezet

A CRISPR lokuszokat a közvetlen ismétlések vagy a " közvetlen ismétlések  " (vagyis mindazok az azonos olvasási irányba orientált) váltakozása jellemzi  , rövidek (21-37 bázispár között) és szekvenciák által rendszeresen elosztva. Úgynevezett "  távtartók  ", általában egyedi, 20–40 bázispár. A nukleotidszekvenciák és a CRISPR lókuszok hossza ugyanazon faj esetében konzervált, de fajonként változó. A CRISPR lókuszok általában szomszédosak a cas génekkel (a „  CRISPR asszociált  ” esetében), amelyektől 300–500 bázispár szekvencia választja el őket, az úgynevezett „ vezető  ” szekvencia  .

Az első elemeket arról, hogy maga a CRISPR szerkezet (vagyis a közvetlen ismétlések és távtartók egymásutánjából álló rész) hogyan fejlődik, Pourcel és munkatársai munkája szolgáltatta . . Ez a Yersinia pestis CRISPR-lokuszaira vonatkozó munka azt mutatta, hogy az új távtartók beszerzése polarizált, míg egy vagy több „ távtartó  ” elvesztése  a CRISPR-lókusz egész területén bekövetkezhet. Az akvizíció a vezető mellett történik . A vezetőt a származásban tartják, de a származások között nem.

Gének esete

Csak a CRISPR-t hordozó genomokban találhatók meg, a cas- gének általában a CRISPR-lokuszok közelében helyezkednek el. 2005-től legalább 45 ilyen típusú géncsaládot írtak le. Az első 4 szigorúan társul. E gének közül a legfontosabb a cas1 , amely szinte az összes CRISPR-Cas komplexben jelen van (néha CRISPR / Cas néven is emlegetik). A CRISPR-Cas altípusok szórványos eloszlása ​​számos horizontális transzfer eseményre utal a mikrobiális evolúció során. A CRISPR-Cas rendszerek nagyon nagyok lehetnek (akár 20 különböző gén), és úgy tűnik, hogy eltérő a származási mintázatuk, amelyek csak nagyon korlátozott számú fajban találhatók meg. Az ügy gének foltos hipertermofil élőlények először láttam, hogy szerepet játszik a DNS-javítás.

Szerepek

Noha a CRISPR funkcióit még nem határozták meg egyértelműen, számos hipotézist vetettek fel:

A CRISPR-Cas rendszer "immun" szerepe

2005-ben megfigyelték, hogy bizonyos távtartók szekvenciái megegyeznek bizonyos mobil genetikai elemek , különösen a vírusok és a plazmidok szekvenciáival .

2007 márciusában, Philippe Horváth csapata kimutatta, hogy a sejtek kezelése során CRISPR a fágok vezet megjelenése új időközönként, hogy ezen intervallumok adódnak genomanyagot A fágok és a költözés vagy túl ezen intervallumok módosítja az ellenállást a baktériumok fágokhoz.

A CRISPR-Cas rendszer (CASS) az invazív fágok és plazmidok elleni védekező mechanizmus , amely az eukarióták RNSi-rendszeréhez hasonló módon működik . Az idegen gének fragmenseinek kromoszómáik nem kódoló részeibe történő integrálásával az archeák vagy baktériumok rezisztenciát szereznek a fágokkal és a plazmidokkal szemben. Ezért az immunrendszer egy olyan formája, amelyet a leánysejtekbe történő átvitel örököl, lehetővé téve az archeáknak és a baktériumoknak a fágok és plazmidok evolúciójához való gyors alkalmazkodását. 2020-ban egy tanulmány elmagyarázza, hogy a különféle felmerült vírusok genomjából származó markerek hogyan kronológiai sorrendben halmozódnak fel (például „DNS-felvevő”) genomjuk CRISPR-régiójában. Ez az immunizálási szakasz. Immunitás következik: A Cas fehérjék ezt az információt felhasználják bármely ismert vírusú vírus felismerésére és deaktiválására.

Kimutatták, hogy a fágok specifikus gének révén megkerülhetik a CRISPR-Cas rendszert.

Úgy tűnik, hogy egyrészt a baktériumokban és az archeákban megfigyelt CRISPR-Cas rendszerek, másrészt az eukariótákban megfigyelt RNAi rendszer nem egy közös ősből származik. Ezért nem társak.

Molekuláris mechanizmusok

A CRISPR rendszerek használata gének 1. eset és 2. eset részt integráció, távtartó töredékek idegen géneknek a CRISPR.

Három típusú CRISPR-Cas rendszer ismert:

  • Az I. típusú rendszerek egy Cascade komplexet használnak a CRISPR átírások hasításához a pin szintjén . Amikor egy Cascade / spacer komplex társult egy cél-DNS-(elismerés hibridizáció s ) ez toboroz a Cas3 protein, amely hasítja a szálat a cél-DNS;
  • A II-es típusú rendszerek az RNAse III-at használják az ismétlések elválasztására az átiratoktól. A Cas9 fehérje asszociál egy transzkripciós fragmenssel, és a cél DNS felismerése után a Cas9 hasítja ennek a DNS-nek a 2 szálát;
  • A III. típusú rendszerek a Cas6 fehérjét használják a CRISPR átiratok hasítására a csapok szintjén, a kapott transzkriptum szegmensek egy Cas10 komplexhez kapcsolódnak. Ez a rendszer megköveteli, hogy a cél DNS transzkripciója legyen, a Cas10 / spacer komplex ezt követően hasítja a cél DNS egy szálát (nem transzkribált szál), valamint az átírandó RNS-t.

Használat a molekuláris biológiában

A CRISPR- Cas9 rendszer , különösen fejlesztette ki a francia kutató Emmanuelle Charpentier alapján egy ötlet volt Bécsben 2000 elején (amely lehetővé tette neki megközelíteni a 2015-ös Nobel-díj) óta az 2010-es évek vált forradalmi géntechnológia eszköz, amely lehetővé teszi a DNS-szekvenciák egyszerűbb és pontosabb módosítását. Ez végső soron segít megszüntetni bizonyos betegségek, de felveti az orvosi és környezeti etika , hogy eugenika és a környezeti következményeket manipuláció a genom, ha ez az eszköz alkalmazható örökletes sejteket.

A CRISPR Therapeutics , egy fiatal cég, amelyet Emmanuelle Charpentier alapított, hogy szabadalmaztassa és fejlessze ezt az eszközt, a világ egyik leggazdagabban finanszírozott preklinikai biotechnológiai vállalatává vált, de vitát folytat e technológia szabadalmaztatása. 2016 áprilisában a Charpentier a Nature folyóiratban bemutatta a CRISPR használatának még hatékonyabb verzióját.

A CRISPR-Cas9 genomszerkesztési technikát Emmanuelle Charpentier francia kutató csapata fedezte fel, Jennifer Doudna amerikai professzor segítette. Később 2012-ben számos kutató fejlesztette ki, köztük Feng Zhang molekuláris biológus , a Broad Institute  (en) (a Harvard és az MIT kapcsán ). Berkeley kihívást a szabadalom megadása az Broad Intézetének ez a felfedezés előtt a Egyesült Államok Szabadalmi és Védjegy Hivatal fellebbezési fórumon . 2017. február 15-én az Egyesült Államok Szabadalmi és Védjegyhivatala érvényesnek tekintette a Broad Institute által benyújtott, a CRISPR / Cas9 eukarióta sejtekben történő felhasználására vonatkozó szabadalmakat . Azonban a Berkeley Egyetem azon állításait (a Jennifer Doudna és Emmanuelle Charpentier által benyújtott szabadalmak eredeténél ), hogy a CRISPR / Cas9-et minden típusú genetikai anyagra (ideértve az eukarióta sejteket is) alkalmazzák, nem utasították el. 2018 januárjában az Európai Szabadalmi Hivatal visszavonta a Broad Institute által benyújtott (és eredetileg elfogadott) CRISPR-Cas9 egyik fő szabadalmat. Ez utóbbi fellebbezett a határozat ellen.

Etikai kérdezés

Számos tudós és más személyiség a megőrzés etikáját szorgalmazta a gének ellenőrzése nélkül, tekintve, hogy ez a technika potenciálisan képes átalakítani a természet világát és az emberek kapcsolatait. Ami azt jelenti, hogy szándékosan javasolják a kihalást eszközként.

A 2016. szeptemberi Természetvédelmi Világkongresszus elfogadta az IUCN ügyvezető igazgatóját és bizottságait, hogy „sürgősen értékeljék a génmeghajtók és más kapcsolódó technikák következményeit, valamint azok lehetséges hatásait a biológiai sokféleség megőrzésére és fenntartható használatára, valamint az előnyök igazságos megosztására. genetikai erőforrásokból adódóan, így az IUCN útmutatást dolgoz ki ebben a témában, miközben tartózkodik a génmeghajtók konzerválási vagy egyéb célú felhasználásával kapcsolatos kutatási tevékenységek - ideértve a terepi kísérleteket is - támogatásától vagy jóváhagyásától, amíg az ilyen értékelés le nem zárul. "

Népszerű kultúra

  • A CRISPR-cas9 rendszer az elbukott kísérlet alapja a Rampage: Out of Control című filmben .
  • A CRISPR-cas9 rendszer részt vesz Robin Cook: Pandemic című regényének cselekményében .

Függelékek

Kapcsolódó cikkek

Külső linkek

Hivatkozások

  1. A. Abbott: „A csendes forradalmár: Hogyan változtatta meg robbanásszerűen a CRISPR együttes felfedezése Emmanuelle Charpentier életét? A mikrobiológus évekig laborokat mozgatott és élvezte a magányt. Aztán a génszerkesztéssel kapcsolatos munkája a tudományos reflektorfénybe sodorta ”, Nature , n o  532., 2016. április 28., pp. 432-434, doi: 10.1038 / 532432a.
  2. (in) Yoshizumi Ishino, Hideo Shinagawa, Kozo Makino, Mitsuko Amemura és Atsuo Nakata, "  Az iap gén nukleotidszekvenciája, amely felelős az alkalikus foszfatáz izozim konverzióért Escherichia coliban, és a géntermék azonosítása  " , Journal of Bacteriology , Vol. .  169, n o  12,1987, P.  5429-5433 ( PMID  3316184 ).
  3. (in) KE Nelson és mtsai. , „  Bizonyíték az Archæa és a baktériumok közötti laterális géntranszferre a Thermotoga maritima genomszekvenciájából  ” , Nature , vol.  399, n °  6734,1999. május 27, P.  323–9 ( PMID  10360571 ).
  4. (en) Ruud Jansen, Jan DA van Embden, Wim Gaastra és Leo M. Schouls, „  A prokarióták között ismétlődő újszerű szekvenciacsalád azonosítása  ” , OMICS , vol.  6, n o  1,2002, P.  23–33 ( PMID  11883425 ).
  5. (in) Mojica Francisco és mtsai. , „  Az Archæa Haloferax mediterranei és a Haloferax volcanii legnagyobb replikonjaiban hosszú szakaszok vannak a rövid tandem ismétlésekben, és részt vehetnek a replikon particionálásában  ” , Molecular Microbiology , vol.  17, n o  1,1995, P.  85–93 ( PMID  7476211 ).
  6. (in) A. Aranaz, "a  spoligotipizálás profiljának változásai változó ismétlődés törléséből adódnak egy élő Mycobacterium tuberculosis laboratóriumi izogén törzsben  " , Journal of Clinical Mirobiology , vol.  42, n o  11,2004. november, P.  5388–91 ( PMID  15528751 ).
  7. (en) Francisco Mojica, Cesar Diez-Villaseñor, Elena Soria és Guadalupe Juez, „  Rendszeresen elhelyezett ismétlődések családjának biológiai jelentősége Archæa, Bacteria és mitochondria genomjában  ” , Molecular Microbiology , vol.  36, n o  1,2000. április, P.  244-246 ( PMID  10760181 ).
  8. (en) Ruud Jansen, Jan DA van Embden, Wim Gaastra és Leo M. Schouls, „  Prokariótákban a DNS-ismétlésekhez kapcsolódó gének azonosítása  ” , Molecular Microbiology , vol.  43, n o  6,2002, P.  1565-1575 ( PMID  11952905 , online olvasás , hozzáférés: 2015. augusztus 23. ).
  9. (en) JD van Embden és mtsai. , „  A Mycobacterium tuberculosis komplex baktériumok közvetlen ismétlődő lokuszának genetikai variációja és evolúciós eredete  ” , Journal of Bacteriology , vol.  182, n o  9,2000. május, P.  2393-401 ( PMID  10762237 ).
  10. (en) J. Kamerbeek et al. , „  A Mycobacterium tuberculosis egyidejű kimutatása és törzsdifferenciálása diagnózis és epidemiológia céljából  ” , Journal of Clinical Microbiology , vol.  35, n o  4,1997. április, P.  907-14 ( PMID  9157152 ).
  11. (en) Hoe és mtsai. , „Az  M1 szerotípus A csoport Streptococcus törzsének gyors molekuláris genetikai altípusa  ” , Emerging Infectious Diseases , vol.  5, n o  21999. március-április, P.  254–63 ( PMID  10221878 ).
  12. (in) Kimberley D. Seed , David W. Lazinski Stephen B. Calderwood és Andrew Camilli , "  Egy bakteriofág kódolt IKT saját CRISPR / Cas adaptív válasz, hogy elkerüljék a fogadó veleszületett immunitás  " , Nature , vol.  494, n °  7438,2013. február 28, P.  489-91 ( PMID  23446421 , PMCID  3587790 , DOI  10.1038 / nature11927 , online olvasás , hozzáférés: 2015. augusztus 23. ).
  13. (en) Daniel H. Haft, Jeremy Selengut, Emmanuel F. Mongodin és Karen E. Nelson, „  A prokarióta genomokban 45 CRISPR-asszociált (Cas) fehérjecsalád és több CRISPR / Cas altípus létezik  ” , PLOS Computational Biology , vol.  1, n o  6,2005, P.  1–10 ( PMID  16292354 , PMCID  PMC1282333 , online olvasás , 2015. augusztus 23. ).
  14. (in) KS Makarova, YI Wolf és EV Koonin, "  A védelmi rendszerek összehasonlító genomikája archeákban és baktériumokban  " , Nucleic Acids Research , Vol.  41, n o  8,2013. március 6, P.  4360-4377 ( PMID  23470997 , PMCID  PMC3632139 , DOI  10.1093 / nar / gkt157 , online olvasás , hozzáférés : 2015. augusztus 28. ).
  15. (in) Reidun Lillestøl K. Peter Redder, Roger A. Garrett és Kim bruger, "  Egy feltételezett vírusvédelmi mechanizmus archeális sejtekben  " , Archaea , vol.  2, n o  1,2006. augusztus, P.  59–72 ( PMID  16877322 , PMCID  PMC2685585 , online olvasás , 2015. augusztus 23. ).
  16. (in) Xu Peng, Kim Brügger, Biao Shen, Lanming Chen Qunxin She és Roger A. Garrett, "A  nemzetségspecifikus fehérje kötődik a DNS-ismétlések (rövid, rendszeresen elosztott ismétlések) nagy csoportjaihoz, amelyek jelen vannak a Sulfolobus Genomokban  " , Journal of Bakteriology , vol.  185, N o  8,2003. április, P.  2410-7 ( PMID  12670964 , PMCID  PMC152625 , online olvasás , hozzáférés: 2015. augusztus 23. ).
  17. (en) Makarova KS, L. Aravind, NV Grishin, IB Rogozin és EV Koonin, „  A termofil archeákra és baktériumokra specifikus DNS-javító rendszer, amelyet genomi kontextus elemzéssel jósoltak  ” , Nucleic Acid Research , vol.  30, n o  22002. január 15, P.  482-96 ( PMID  11788711 , PMCID  PMC99818 , online olvasás , hozzáférés: 2015. augusztus 23. ).
  18. (en) John van der Oost, Edze R. Westra, Ryan N. Jackson és Blake Wiedenheft, „  A CRISPR-Cas rendszerek strukturális és mechanisztikai alapjainak feltárása  ” , Nature Reviews Microbiology , vol.  12, n o  7,2014. június 9, P.  479-492 ( PMID  24909109 , PMCID  PMC4225775 , DOI  10.1038 / nrmicro3279 , online olvasás , hozzáférés : 2015. augusztus 28. ).
  19. (en) C. Pourcel, G. Salvignol és G. Vergnaud, „A  Yersinia pestis CRISPR elemei újbóli ismétlődéseket szereznek a bakteriofág DNS preferenciális felvétele révén, és további eszközöket nyújtanak az evolúciós vizsgálatokhoz  ” , Microbiology , vol.  151, n o  3,2005. március, P.  653–63 ( PMID  15758212 ).
  20. (in) RT DeBoy, EF Mongodin JB Emerson és KE Nelson, "  Chromosoma Evolution in the Thermotogales: wide- inverions and strain diversification of CRISPR szekvenciák  " , Journal of Bacteriology , Vol.  188, n o  7,2006. április, P.  2364-74 ( PMID  16547022 , PMCID  PMC1428405 , online olvasás , 2015. augusztus 23. ).
  21. (en) Ahmed Fadiel, Stuart Lithwick, Gopi Ganji és Stephen W. Scherer, „  Figyelemre méltó szekvencia-aláírások az archéális genomokban  ” , Archæa , vol.  1, n o  3,2003. október, P.  185–90 ( PMCID  PMC2685567 , online olvasás , hozzáférés: 2015. augusztus 23. ).
  22. (en) FJ Mojica, C. Díez-Villaseñor, J. García-Martínez és E. Soria: „  A rendszeresen elhelyezett prokarióta ismétlések intervenáló szekvenciái idegen genetikai elemekből származnak  ” , Journal of molekuláris evolúció , vol.  60, n o  22005. február, P.  174–82 ( PMID  15791728 , online olvasás , hozzáférés : 2015. augusztus 26. ).
  23. (in) A. Bolotin, B. Quinquis, A. Sorokin és SD Ehrlich, "  Clustered Regularly interspaced short palindromic Repeats (CRISPRs) spacers of extrachromosomal origin-have  " , Microbiology , vol.  151, N o  8,2005. augusztus, P.  2551-61 ( PMID  16079334 , DOI  10.1099 / mic.0.28048-0 , online olvasás , hozzáférés : 2015. augusztus 28. ).
  24. .
  25. (in) Julie E. Samson , Alfonso H. Magadan Mourad Sabry és Sylvain Sparrow , "  A fág bosszúja: a baktériumok védekezésének legyőzése  " , Nature Reviews Microbiology , vol.  11, n o  10,2013. augusztus 27, P.  675–87 ( PMID  23979432 , DOI  10.1038 / nrmicro3096 , online olvasás , hozzáférés : 2015. augusztus 26. ).
  26. Sungchul Kim és mtsai. , Prespacerek szelektív betöltése és feldolgozása a CRISPR pontos adaptálásához , 2020. DOI : 10.1038 / s41586-020-2018-1
  27. kutatás ,2020 ápriliso.  22.
  28. (in) Joe Bondy-Denomy , April Pawluk , Karen L. Maxwell és Alan R. Davidson , "  Bakteriophage gének, amelyek inaktiválják a CRISPR / Cas immunrendszeri baktériumot  " , Nature (folyóirat) , vol.  493, n °  7432,2012. január 17, P.  429-32 ( PMID  23242138 , DOI  10.1038 / nature11723 , online olvasás , hozzáférés : 2015. augusztus 26. ).
  29. Luciano A. Marraffini , „  CRISPR-Cas immunitás prokariótákban  ”, Nature , vol.  526,1 st október 2015, P.  55–61 ( DOI  10.1038 / nature15386 , online olvasás ).
  30. (a) "  Oncology: Studying rák genomok gén gén javíthatnák kezelés  " , The Economist ,2021. február 13( online olvasás , konzultáció 2021. február 13 - án ).
  31. Jean-Philippe Braly, "  CRISPR-Cas9: a svájci bicska, amely forradalmasítja a genetika  " , a tudományok Actualités ,2015. július 30(megtekintés : 2015. augusztus 26. ) .
  32. Morgane Heuclin-Reffait, "  A" Crispr / Cas9 "segítségével a DNS módosítása szinte olyan egyszerűvé válik, mint egy másolás és beillesztés  " , a felszabadítási tudományoknál ,2015. július 24(megtekintve 2015. augusztus 26-án )
  33. Heidi Ledford, hogy az amerikai szabadalmi CRISPR szonda ki fog játszani; A döntés meghatározhatja, hogy ki profitál a génszerkesztő technikából a jövőben , 2016. március 7-én.
  34. Kelly Servick, "A vádak a megtévesztésről és a megtévesztésről a CRISPR szabadalmi harcában" , Science , 2016. március 8.
  35. Sharon Begley, "A széleskörű intézet éles vitában uralkodik a CRISPR szabadalmaival szemben" , Stat , 2017. február 15, 2017. február 17.
  36. Sharon Begley, "6 elvihetőség a CRISPR szabadalmi döntésről" , Scientific American , 2017. február 16., 2017. február 17.
  37. S. Willquist, "CRISPR szabadalmi visszavonták az EPO-nál" , Lexology , január 29, 2018.
  38. Felhívás konzervációra lelkiismerettel: nincs hely a génmeghajtóknak a természetvédelemben  ; Vandana Shiva és más környezetvédők figyelmeztető hangot adnak a „gének kísérletezéséről” .
  39. IUCN-politika kidolgozása a biodiverzitás megőrzésére és a szintetikus biológiára vonatkozóan .
  40. (in) Ibtissem Grissa Vergnaud Gilles és Christine Pourcel "  A CRISPRdb adatbázis és eszközök a távtartók és ismétlések CRISPR szótárainak megjelenítésére és létrehozására  " , BMC Bioinformatics , vol.  8,2007. május( PMID  17521438 , online olvasás , hozzáférés : 2015. november 29. ).
  41. (in) Christine Rousseau, Mathieu Gonnet, Marc Le Romancer Jacques és Nicolas, "  Crispi egy CRISPR interaktív adatbázist  " , bioinformatika , vol.  25, n o  24,2009. október 21, P.  3317-3318 ( PMID  19846435 , PMCID  PMC2788928 , DOI  10.1093 / bioinformatics / btp586 , online olvasás , hozzáférés : 2015. augusztus 26. ).